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ETUDE DU TYPE RESPIRATOIRE
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1. PRINCIPE

L’étude du type respiratoire d’un micro-organisme permet de définir ses rapports avec l’oxygène (certaines bactéries nécessitent O2, d’autres l’absence d’O2).

Pour cela, on utilise un milieu de culture, type gélose viande-foie (gélose VF) dont les caractéristiques sont les suivantes :

  • Elle contient du glucose qui agit comme réducteur et permet la diminution du potentiel d’oxydo-réduction ;
  • Elle ne contient pas de nitrates qui pourraient permettre le développement en anaérobiose de bactéries aérobies strictes ayant une nitrate réductase ;
  • Elle présente un gradient de pression partielle en oxygène qu’on crée :
    • En conditionnant le milieu dans un tube étroit (tube de Prévot)
    • En régénérant le milieu par ébullition (20 min à 100°C), ce qui permet l’élimination de tous les gaz dissous
    • En incubant le milieu avec le bouchon légèrement dévissé pour permettre la pénétration progressive de l’oxygène. Celle-ci est ralentie par la présence de gélose à faible concentration.

 

On peut schématiser ce gradient de pression partielle en oxygène de la façon suivante :

z

2. TECHNIQUE ET LECTURE

Etude du type respiratoire

Milieu

Technique

Résultats

Gélose VF (viande-foie)
Composition en g.L^-1 d’eau distillée :

  • Viande-foie…….30
  • Glucose…………2
  • Agar…………….6

pH : 7,4-7,6

Régénérer le milieu pendant 20 min au bain-marie bouillant (bouchon légèrement dévissé).

Laisser refroidir aux environ de 45°C (milieu en surfusion).

Ensemencer dans la masse en spirales à l’aide d’une pipette Pasteur longue, fermée et chargée de la suspension à étudier.

Laisser solidifier.

Etuver 24h à 37°C, bouchon dévissé.
z

  • Type respiratoire
  • Production de gaz

-Culture en surface du milieu uniquement

-Culture uniquement en aérobiose

 

-Souche aérobie stricte.
(AS)

-Culture sur toute la hauteur du milieu

-Culture en aérobiose et anaérobiose

 

-Souche aéro-anaérobie facultative
(AAF), gaz + (si bulles dans la gélose) ou -

-Culture dans la profondeur de la gélose, absence de culture en surface

-Culture en anaérobiose

-Souche anaérobie stricte
(ANS), gaz + (si bulles dans la gélose) ou -

-Culture uniquement dans une zone intermédiaire

-Culture en présence de faible concentration en dioxygène

 

-Souche micro-aérophile

Causes d’erreur

  • Gélose ensemencée trop chaude : absence de culture ou faux aérobie strict
  • Gélose ensemencée trop froide : culture le long de la piqûre uniquement
  • Bouchon trop vissé pendant l’incubation : absence de culture des aérobies stricts, faux aéro-anaérobie facultatif pour les anaérobies stricts.
  • Gélose mal régénérée : faux aéro-anaérobie facultatif

 

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Par Brigitte VERON - Collectif Photo-Reims