Milieu et réactifs

Technique

Résultats

Milieu Clark et Lubs
Composition en g/L eau distillée

Peptone trypsique…………...5 à 7
Glucose…………………………5
Phosphate bipotassique…………5

          pH = 7

Réactifs

• Test RM :

   rouge de méthyle en solution dans l’éthanol f

• Test VP :

 - soude c
 - a-naphtol en solution dans l’éthanol f  n Xn

- Ensemencer un milieu Clark et Lubs avec quelques gouttes de suspension bactérienne.

- Etuver 24 à 48 h à 37°C.

Après vérification de la culture (trouble du milieu) :

Test RM
- Tranférer à l'aide d'une pipette Pasteur environ 0,5 mL de milieu Clark et Lubs dans un tube à hémolyse (non stérile)
- Ajouter 1 goutte de rouge de méthyle puis boucher le tube avec du coton cardé.

TEST VP

- Transférer dans un tube à hémolyse (non stérile), à l'aide d'une pipette Pasteur, environ 0,5 mL de milieu Clark et Lubs; y ajouter, volume à volume, la soude et l'a-naphtol (environ 0,5 mL de chaque réactif),
- Boucher le tube avec du cordon cardé, agiter et incliner le tube pour favoriser l'oxygénation du milieu
- Attendre 10 min avant de conclure à un résultat négatif.

Test RM

Test VP

- apparition d’une coloration rouge (en surface)
- présence d’acétoïne
- fermentation du glucose par la voie butylène glycolique avec production d’acétoïne : souche VP +

- pas d’apparition de coloration rouge
- absence d’acétoïne
- pas de fermentation du glucose par la voie butylène glycolique (pas de  production d’acétoïne) : souche VP -