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MILIEU DE CLARK ET LUBS (CL)
TESTS RM ET VP
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  1. PRINCIPE DES TESTS RM ET VP

Le milieu de Clark et Lubs permet l'étude des produits de fermentation du glucose: différenciation entre les fermentations « acides mixtes » et « butylène glycolique ».

2.1. Test RM (rouge de méthyle)

Ce test permet la mise en évidence, grâce au rouge de méthyle, de la fermentation acides mixtes par acidification d'un milieu glucosé après fermentation du glucose.

2.2. Test VP (Vosges-Proskauer)

Ce test permet la mise en évidence de la production d'acétoïne (ou 3-hydroxy-butanone) au cours de la fermentation butylène glycolique: en présence d'une base forte (soude ou potasse) et d'a-naphtol, l'acétoïne donne une coloration rouge en milieu très oxygéné.

Remarque: le test VP est beaucoup plus spécifique que le test RM qui ne donne qu'une idée globale du métabolisme. Le test VP est particulièrement intéressant pour caractériser le groupe Klebsiella-Enterobacter-Serratia des entérobactéries.

  1. TECHNIQUE

Milieu Clark et Lubs : tests RM et VP

Milieu et réactifs

Technique

Résultats

 

Milieu Clark et Lubs
Composition en g/L eau distillée

Peptone trypsique…………...5 à 7
Glucose…………………………5
Phosphate bipotassique…………5

          pH = 7

 

       z

 

Réactifs

  • Test RM :

   rouge de méthyle en solution dans l’éthanol f

  • Test VP :

 - soude c
 - a-naphtol en solution dans l’éthanol f  n Xn

 

- Ensemencer un milieu Clark et Lubs avec quelques gouttes de suspension bactérienne.

- Etuver 24 à 48 h à 37°C.

Après vérification de la culture (trouble du milieu) :

Test RM
- Tranférer à l'aide d'une pipette Pasteur environ 0,5 mL de milieu Clark et Lubs dans un tube à hémolyse (non stérile)
- Ajouter 1 goutte de rouge de méthyle puis boucher le tube avec du coton cardé.

TEST VP

- Transférer dans un tube à hémolyse (non stérile), à l'aide d'une pipette Pasteur, environ 0,5 mL de milieu Clark et Lubs; y ajouter, volume à volume, la soude et l'a-naphtol (environ 0,5 mL de chaque réactif),
- Boucher le tube avec du cordon cardé, agiter et incliner le tube pour favoriser l'oxygénation du milieu
- Attendre 10 min avant de conclure à un résultat négatif.

Test RM
z
z

 

- coloration rouge
- milieu acide
- fermentation du glucose par la voie des acides mixtes (production d’acides forts) : souche RM +

 

- pas de coloration rouge
- milieu alcalin
- pas de fermentation du glucose par la voie des acides mixtes : souche RM -

Test VP

z

 

 

z

 

 

 

- apparition d’une coloration rouge (en surface)
- présence d’acétoïne
- fermentation du glucose par la voie butylène glycolique avec production d’acétoïne : souche VP +

 

 

 

- pas d’apparition de coloration rouge
- absence d’acétoïne
- pas de fermentation du glucose par la voie butylène glycolique (pas de  production d’acétoïne) : souche VP -

Causes d'erreur

  • Erreur de bouillon (bouillon sans glucose)
  • Incubation trop courte (test RM)

Remarques:
- une souche RM + est habituellement VP - et vice-versa.
- une souche RM - (en 48 h) peut apparaître RM + en 24h

 

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Par Brigitte VERON - Collectif Photo-Reims