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MILIEU AU CITRATE DE SIMMONS
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1. PRINCIPE

Ce milieu ne contient qu'une seule source de carbone: le citrate. Seules les bactéries capables d'utiliser le citrate pourront cultiver sur ce milieu. Sachant que le citrate est utilisé selon la réaction:
citrate + 3 H2O    z    acide citrique + 3 OH-

l'utilisation du citrate s'accompagnera d'une alcalinisation mise en évidence par le bleu de bromothymol.

2. TECHNIQUE

Utilisation du citrate comme seule source de carbone

Milieu

Technique

Résultats

 

Milieu au citrate de Simmons
Composition en g/L eau distillée

Sulfate de Mg..............................0,2
Phosphate monoammoniaqué.........1
Phosphate bipotassique...................1
Citrate de sodium..........................2
NaCl................................................5
BBT...........................................0,08
Agar...............................................15
       pH=6,8
     z
NB 1 : milieu synthétique
NB 2 : la cupule CIT de la galerie api 20E a une composition identique, sans agar.

- Ensemencer la pente selon une strie longitudinale avec une pipette chargée de suspension (préparée à partir d'une culture sur milieu gélosé, en prenant soin de ne pas râcler le milieu pour ne pas apporter d'éléments nutritifs susceptibles de fausser les résultats).

- Etuver 24h à 37°C, sans trop visser le bouchon.
                   z

 

z
-culture et virage au bleu du BBT

 

- alcalinisation

 

- la souche est capable d’utiliser le citrate comme seule source de carbone : souche citrate de Simmons +

 

z
-absence de culture et absence de virage du BBT
 
- absence d’alcalinisation

- la souche n’est pas capable d’utiliser le citrate comme seule source de carbone : souche citrate de Simmons -

Causes d’erreur

  • Inoculum apportant une source de carbone
  • Bouchon mal dévissé (accumulation de C02 qui peut masquer l’alcalinisation) : milieu vert avec culture.

 

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Par Brigitte VERON - Collectif Photo-Reims